什么是Neuromab 抗體的親和力，如何進(jìn)行測(cè)定？
2021-09-10 1250
Neuromab 抗體是由B細(xì)胞分泌的一類蛋白質(zhì)，針對(duì)某種病原有免疫能力，故稱之為抗體。而抗體親和力是指抗體分子與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度，術(shù)語(yǔ)名稱通常是解離常數(shù)KD。通常，抗原抗體分子之間親和力包括離子鍵、氫鍵、疏水作用及范德華力等。
抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)是一個(gè)可逆的反應(yīng)，既有正相反應(yīng)過程，即抗原和抗體結(jié)合反應(yīng)生成抗原-抗體復(fù)合物的正反應(yīng)過程，也有逆向反應(yīng)，抗原-抗體復(fù)合物解離反應(yīng)生成抗原、抗體的逆反應(yīng)過程。
目前，Neuromab 抗體親和力測(cè)定方法根據(jù)檢測(cè)原理分為熱力學(xué)檢測(cè)方法：等溫滴定量熱法、動(dòng)力學(xué)檢測(cè)方法動(dòng)態(tài)平衡檢測(cè)方法。下面，創(chuàng)亞化工小編將為大家分析等溫滴定量熱法和動(dòng)態(tài)平衡測(cè)定法的基本原理。
一、等溫滴定量熱法：
等溫滴定量熱測(cè)定生物分子反應(yīng)熱，同時(shí)確定結(jié)合/解離平衡常數(shù)、反應(yīng)化學(xué)量（n）、焓（ΔH）和熵（ΔS）。微量熱儀中有兩個(gè)池，參比池（水）和樣品池。參比池和樣品池被設(shè)定到所需的實(shí)驗(yàn)溫度。將裝有配體分子的滴定針插入包含目標(biāo)蛋白的樣品池中并逐漸滴定注入。
當(dāng)有配體與蛋白質(zhì)結(jié)合，則可檢測(cè)到被吸收或是被釋放的熱量變化。每一次滴定時(shí)，量熱儀測(cè)量被釋放或吸收的所有熱量，直到結(jié)合反應(yīng)達(dá)到平衡。測(cè)得的熱量與結(jié)合量成正比。
二、動(dòng)態(tài)平衡測(cè)定法
基于該原理的常用方法有ELISA，Cell-BasedELISA、流式細(xì)胞術(shù)（FACS）、均相時(shí)間分辨熒光（HTRF），在一定抗原存在情況下，將待測(cè)抗體進(jìn)行梯度稀釋，檢測(cè)抗原-抗體復(fù)合物的濃度，當(dāng)抗原-抗體復(fù)合物濃度站總抗原濃度一半時(shí)，此時(shí)，Neuromab 抗體的濃度值（EC50）即為KD值。
